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商品詳情

透射電鏡檢測

 
商品編號:
JSY-011
品牌:
金益柏
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0
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產品介紹Product Description

規格:

分類:生化檢測

儲存條件:

用途:

注意事項:

一、服務介紹
         透射電子顯微鏡(Transmission Electron Microscope,TEM)是使用最為廣泛的一類電鏡。通過發射電子束從而穿過超薄的樣品,同時與樣本相互作用,既而形成圖像。透射電鏡具有分辨率高和放大倍數高的優點。其分辨率為0.10.2nm,放大倍數為幾萬到幾十萬倍。目前透射電鏡已經廣泛的應用到癌癥研究,病毒學研究,微生物學,細胞學研究等生物領域。

二、實驗原理
透射電鏡是以電子束透過樣品經過聚焦與放大后所產生的物像,投射到熒光屏上或照相底片上進行觀察。電子與樣品中的原子碰撞而改變方向,從而產生立體角散射。散射角的大小與樣品的密度、厚度相關,因此可以形成明暗不同的影像。由于電子易散射或被物體吸收,故穿透力低,必須制備超薄切片(通常為50100 nm)。要在機體死亡后的數分鐘內取材,組織塊要小(1mm3以內),常用戊二醛和鋨酸雙重固定,包埋介質包埋,用超薄切片機切成薄片,再經醋酸鈾和檸檬酸鉛等進行電子染色。

三、實驗流程

1.取材

2.固定

3.脫水

4.包埋

5.固化

6.超薄切片機切片(50-60 nm)

7.3%醋酸鈾-枸櫞酸鉛雙染色

8.透射電鏡觀察,拍片

四、客戶提供

組織塊、細胞等

五、公司提供

基本實驗步驟、藥品、樣品處理、圖片及圖片分析

實驗周期2-3

六、透射電鏡取材注意事項

取材是電鏡樣品制備的第一步,也是十分重要的一步。其操作成功與否直接關系到整個實驗的成敗。 為了得到好的結果,請務必認真做好最關鍵的第一步取材。因取材不規范導致實驗失敗本公司概不負責!取材基本要點:快(1min)、冷(4 ℃)、?。?mm 3 )、凈(無雜質)、準(部位準確)

動植物 組織取材流程及要求:

取材流程: 動物麻醉后,快速取出需要檢測的組織,將組織切成 1 mm 3 左右小塊,固定于 2.5%戊二醛固定液 4℃過夜后快遞。植物組織除麻醉外,其他操作相同。
取材要求:
1.定位準確:解剖水平的準確定位誤差應≤1mm。注意各組實驗動物取材區位及方位的一致性和代表性。
2.操作迅速:組織離開活體后,以最快的速度浸入戊二醛固定液,0.5 min 或最多2 min。事先準備好 l 1.5ml  尖頭 P EP  管里面盛滿預冷的戊二醛固定液。
3.標本尺寸大?。航M織塊大小需要在 1 mm 3 左右,樣品太大會導致樣品固定不充分。(提示:把較大標本塊修整成符合要求的顆粒時,須事先準備一個蠟盤,滴入戊二醛固定液,把標本浸在液滴中修整,確認每個小標本顆粒都包含需要的結構內容,用牙簽挑出 3~5 粒標本,放入 l 1.5ml  尖頭 P EP  管。)

4.保持低溫環境:為降低自溶酶活性,最好在 4℃低溫條件下取材,容器和器械預冷;將修整好的標本塊放入戊二醛固定液后,普通 4℃冰箱保存。細胞取材流程及要求

取材流程: 細胞直接刮下,細胞懸液離心,棄上清,PBS 清洗 2 次,離心成團,加入 2.5%戊二醛固定液 4℃過夜后快遞。懸浮細胞、菌液可直接視為細胞懸浮液操作。

固體培養基培養的菌可直接將菌落挑到 PBS 中,后續操作一致。
取材要求:
1.確認細胞數量充足(6cm 或 10cm 皿長滿),離心后在 ep 管中 綠豆大??;
2.新鮮配置的電鏡專用 2.5%戊二醛固定液,PH 值 7.3-7.4;
3.貼壁細胞用柔軟細胞劃子輕輕刮起成細胞懸液,盡量不要反復來回刮;
4.把細胞懸液置入潔凈 l 1.5ml  尖頭 P EP  管;
5.選擇合適的離心速度和時間離心,一般 1000rpm 至 3000rpm,5min 至 10min(轉
速及洗的時間請根據具體情況具體分析,比較脆弱敏感的細胞,盡量低轉速、短時間,
以細胞離心成團為準!S PBS  洗的時間過長,容易造成自噬假陽性);
6.取細胞團塊,如致密團結即棄上清,注入新鮮 2.5%戊二醛固定液,4℃保存;
提示:
a.取離心好的細胞團塊時,如細胞分散,可在離心管中注入約 5ul 血清后再次離心,至 EP 管底部出現致密細胞團塊,即送電鏡室。
b.細胞大小不同,最佳離心富集速率和時間不同。提前檢索文獻,避免反復離心損傷細胞。
需要客戶提供的材料 :
1、按照標準方法取材固定的實驗樣本(固定在戊二醛固定液中的樣品)。
2、透射電鏡實驗登記表,電子版發送到 2880647011@qq.com。
樣本儲存運輸標準:
1、儲存:樣本取材后,4℃保存時間不超過 1 個月。
2、運輸:泡沫盒+冰袋的方式運輸, 樣品用氣泡膜包裹,避免標本瓶直接接觸冰塊,固定液充滿 EP 管, 封口膜封口,以免郵寄途中液體滲出。
附表一:固定液配方(本公司有售)
A、 磷酸緩沖液的配方:
a 液:0.2M 磷酸氫二鈉貯備液:
Na2HPO4·2H2O
或:Na2HPO4·7H2O
或:Na2HPO4·12H2O
加雙蒸水至
b 液:0.2M 磷酸二氫鈉貯備液:
17.81 克
26.83 克
35.82 克
500 毫升
NaH2PO4·H2O 13.8 克
或:NaH2PO4·2H2O 15.61 克
加雙蒸水至 500 毫升
使用時將 A 液 40.5ml 和 B 液 9.5ml 混合成 0.2 磷酸緩沖液。(PH7.4)
B、 2.5﹪戊二醛固定液的配方:
0.2M 磷酸緩沖液 50ml
25﹪戊二醛溶液 (電鏡專用) 10ml
加雙蒸水至 100ml
戊二醛溶液最終濃度:pH 值 7.3-7.4


電話:025-86228208 | 傳真:025-86228208 | 電子郵件:lixlae@126.com 站長統計
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